摘要：本文采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統/6460 三重四極桿液質聯用系統建立 了同時檢測抗病du藥物金剛烷胺 (Amantadine) 和利巴韋林 (Ribavirin)的分析方 法。雞肉樣品經提取金剛烷胺和利巴韋林后，分別采用 Agilent Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱凈化，采用薄殼型填料反相 C18 色譜柱 — Agilent Poroshell 120 SB-Aq 色譜柱分離，經配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源的安捷倫三重四極 桿液質聯用系統在正離子模式下監測。該方法在 0.1-50 ng/mL 濃度范圍內線性相 關性良好，相關系數 R2 ≥ 0.999；利巴韋林的添加回收率在 80%-101%、金剛烷胺 的添加回收率在 71%-79%。通過對方法靈敏度、精密度和線性范圍等方法學參 數進行考察，得到所建立的方法能在 12 min 內對 2 種抗病du藥物金剛烷胺和利 巴韋林完成快速、高靈敏度的檢測分析，*法規監測要求。

前言：2013 年底央視曝光山東等地部分養殖戶在肉雞飼養過程中大量濫用抗生素、激 素和抗病毒類藥物，違規喂食金剛烷胺、利巴韋林等抗病du藥品的“速成雞” 流入上海百盛旗下餐飲機構一事。美國快餐業*肯德基和麥當勞在中國被卷 入“速成雞”風波，引發上海人士和全國消費者的廣泛關注和擔憂！農業部對 此事件高度重視，及時責成山東有關部門去調查處理這件事情，也派出了專家 組奔赴山東。以往文獻報道采用 LC/QQQ 分析血漿中利巴韋林或動物源食品中金 剛烷胺[1-3]，但沒有此次事件中被曝光的抗病毒類藥物利巴韋林和金剛烷胺同時 檢測的國家標準和方法，這為相關政府執法檢測部門、生產企業和第三方實驗 室迅速開展監督檢查帶來了技術上的困難。

安捷倫科技作為分析儀器業界品牌，多年來一直致力 于為食品安全領域提供強有力的產品、技術、解決方案。 為應對此次食品安全突發事件，安捷倫科技為廣大分析工 作者提供了分析檢測雞肉中抗病毒類藥物利巴韋林和金剛 烷胺的完整解決方案。

實驗部分 試劑、化學品與消耗品 所有試劑和溶劑均為色譜純級或者分析純級。甲醇、乙 腈和異丙醇購自德國默克 (MERCK)。甲酸、乙酸銨、三lv乙酸和氨水購自美國 Sigma-Aldrich 公司。所用實驗用水為 Millipore Milli-Q 超純水系統現制備的高純去離子水。金剛烷胺 和利巴韋林標準品由北京出入境檢驗檢疫局技術中心提供。 所有標準品用甲醇配制為 1 mg/mL 儲備液，儲存在 -20 °C 冰 箱內（有效期 1 年左右）。用乙腈:水 (50:50) 配制混合工作液 (10 µg/mL)，儲存在 4 °C 下（有效期半個月左右）。使用時 用水對混合工作液進行適當逐級稀釋后使用，現配現用。 實驗采用 Agilent Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱對樣品提 取液進行凈化。

儀器配置 實驗采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統進行分離，其由 下列部件組成： • Agilent 1290 Infinity 二元泵 (G4220A) • Agilent 1290 Infinity 標準自動進樣器 (G4226A) • Agilent 1290 Infinity 自動進樣器冷卻器 (G1330B） • Agilent 1290 Infinity 柱溫箱 (G1316C) 采用配有安捷倫噴射流 (AJS) 電噴霧離子源的 Agilent 6460 三重四極桿液質聯用系統，在正離子模式下進行檢測。 采用 Agilent MassHunter 工作站軟件（B.07 或以上版本）進 行數據采集、定性和定量分析。 樣品前處理 稱取 2 g 雞肉樣品（精確至 0.01 g）至 15 mL 離心管中，依次 加入已知濃度的混合工作液、5 mL 的甲醇:1% 三氯yi酸水溶 液（50:50，V/V），渦旋 30 s，超聲 30 min，5000 r/min 離心 10 min，上清液全部轉移至 15 mL 離心管中；再加入 5 mL 的 甲醇:1% 三氯yi酸（50:50，V/V）重復提取一次，合并全部 提取液；渦旋均勻后重新離心，取出 5 mL 上清液，過 PCX 和 PBA 固相萃取柱進行凈化，流程圖如圖 1 所示。

結果與討論 本文采用含有薄殼型填料顆粒的 Poroshell 120 SB-Aq 色譜 柱對利巴韋林和金剛烷胺進行了有效的色譜分離。流動相 中添加 0.1% 甲酸和 5 mmol/L 乙酸銨可以促進正模式下的 離子化效率。根據利巴韋林和金剛烷胺的結構，實驗可以 采用電噴霧離子源正離子模式測試。實驗結果表明，利巴 韋林可以生成 [M+H]+ (m/z 245.1) 和 [M+Na]+ (m/z 267.1) 分 子離子峰，金剛烷胺可以生成 [M+H]+ (m/z 152.2) 分子離子 峰；分別選擇 [M+H]+ 峰進行子離子掃描，最終確認利巴韋 林選擇 m/z 113（定量子離子）和 96（定性子離子）、金剛 烷胺選擇 m/z 135（定量子離子）和 93（定性子離子）作為 多反應通道監測離子對，所得 MRM 譜圖如圖 2 所示。 在雞肉樣品基質中含有對利巴韋林色譜峰有干擾的物質， 影響結果測定。實驗發現采用 SB-Aq 類型柱填料的色譜柱 在 100% 水相流動相條件下起始，可以實現干擾物與利巴韋 林的基線分離，避免定性定量的干擾，如圖 3 所示。實驗 發現采用 PCX 固相萃取柱對金剛烷胺凈化時，洗脫液中必 須添加 25% 以上的異丙醇才能解吸下來。

結論 采用 1290 Infinity 液相色譜系統/6460 三重四極桿液質聯用系統成功的實現了對雞肉中抗病毒類藥物金剛烷胺和利巴 韋林殘留量的高靈敏、快速的確證定量分析。本方法采用 Bond Elut PCX 和 PBA 固相萃取柱有效的實現了樣品的凈化。 本文所述完整的解決方案可以滿足對雞肉制品中抗病物的快速監督和監測。